Coronavirus syndromu akutního průjmu prasat (SADS-CoV) je nově objevený prasečí enterický patogenní koronavirus, který může způsobit vodnatý průjem u novorozených selat a způsobit významné ekonomické ztráty prasečímu průmyslu.V současné době neexistuje žádná vhodná sérologická metoda pro hodnocení účinnosti SADS-CoV infekce a vakcíny, takže je naléhavá potřeba použít účinný enzymový imunosorbentní test (ELISA), který by tento nedostatek vyrovnal.Zde byl zkonstruován rekombinantní plazmid exprimující spike (S) protein SADS-CoV fúzovaný s doménou Fc lidského IgG pro produkci rekombinantního bakuloviru a exprimovaný v buňkách HEK 293F.Protein S-Fc je purifikován pryskyřicí protein G a zachovává si reaktivitu s protilátkami proti lidskému Fc a SADS-CoV.Poté byl S-Fc protein použit k vývoji nepřímé ELISA (S-iELISA) a optimalizaci reakčních podmínek S-iELISA.Výsledkem bylo, že analýzou hodnoty OD450nm 40 SADS-CoV negativních sér potvrzených imunofluorescenčním testem (IFA) a Western blotem byla stanovena hraniční hodnota 0,3711.Variační koeficient (CV) 6 SADS-CoV pozitivních sér v rámci a mezi běhy S-iELISA byly všechny menší než 10 %.Test zkřížené reaktivity ukázal, že S-iELISA nemá žádnou zkříženou reaktivitu s jinými séry prasečího viru.Navíc na základě detekce 111 vzorků klinických sér byla celková míra koincidence IFA a S-iELISA 97,3 %.Test neutralizace viru se 7 různými hodnotami OD450nm séra ukázal, že hodnota OD450nm detekovaná pomocí S-iELISA pozitivně korelovala s testem neutralizace viru.Nakonec byla provedena S-iELISA na 300 vzorcích séra z prasečí farmy.Komerční soupravy jiných prasečích enterovirů ukázaly, že míra IgG pozitivních SADS-CoV, TGEV, PDCoV a PEDV byla 81,7 %, 54 % a 65,3 %.6 %, resp.Výsledky ukazují, že S-iELISA je specifická, citlivá a reprodukovatelná a může být použita k detekci SADS-CoV infekce v prasečím průmyslu.Tento článek je chráněn autorským právem.všechna práva vyhrazena.
Čas odeslání: 22. června 2021